Фазово-контрастная микроскопия — метод микроскопического наблюдения прозрачных, неокрашенных, не поглощающих света объектов, основанный на усилении контраста изображения. Прозрачные неокрашенные объекты (в том числе живые микроорганизмы) отличаются от окружающей среды по показателю преломления, не поглощают свет, но изменяют его фазу. Эти изменения не улавливаются глазом. При фазово-контрастной микроскопии свет, не поглощенный объектом, проходит через так называемое фазовое кольцо, нанесенное на одну из линз объектива. Фазовое кольцо смещает фазу этого проходящего света на четверть длины волны и снижает его интенсивность. Прохождение прямого, не поглощенного объектом света через фазовое кольцо обеспечивается кольцевой диафрагмой конденсора. Лучи, даже немного отклоненные (рассеянные) в препарате, не попадают в фазовое кольцо и не претерпевают сдвига фазы. В результате разность фаз между отклоненными и неотклоненными лучами усиливается, давая контрастное изображение структуры препарата. Фазово-контрастную микроскопию используют для прижизненного изучения бактерий, грибов, простейших, клеток растений и животных.
Posts Tagged ‘рост’
Фазово-контрастная микроскопия
Вторник, декабря 1, 2009Для люминесцентной микроскопии
Вторник, ноября 17, 2009Для люминесцентной микроскопии применяют либо специальные люминесцентные микроскопы, либо приставки к обычным «биологическим» микроскопам. Люминесцентная микроскопия нашла широкое применение в микробиологической диагностике, помогает проводить ускоренную идентификацию микробов. Первичная (собственная) люминесценция характерна для ряда биологически активных веществ (ароматические аминокислоты, порфирины, хлорофилл, витамины А и В2, тетрациклины и др.). Вторичная (или наведенная) люминесценция возникает в результате обработки исследуемого объекта светящимися красителями — флюорохромами (акридиновый оранжевый, ФИТЦ, бромид эти-дия и др.). Среди различных видов люминесцентной микроскопии наиболее распространены прямое флюорохромирование — окрашивание флюорохромами и иммунофлюоресценция (РИФ).
Электронная микроскопия
Вторник, ноября 3, 2009Электронная микроскопия — метод морфологического анализа с помощью потока электронов. Роль оптических линз выполняют электрические и магнитные поля. Использование в качестве источника излучения потока электронов повышает разрешающую способность микроскопа, измеряемую в нанометрах. Такая высокая разрешающая способность позволяет изучать структуру этих объектов (в том числе и микробов) на субклеточном и макромолекулярном уровне. Электронная микроскопия применяется для изучения субмикроскопической анатомии вирусов, бактерий, грибов, простейших. Метод используется для выявления вирусов с диагностической целью, например рота-вирусов в фильтратах фекалий. Использование электронной микроскопии в сочетании с иммунологическими методами обусловило развитие иммуно-электронной микроскопии. Иммунная электронная микроскопия сыграла большую роль при исследовании гепатитов А и В, вирусных гастроэнтеритов.
Преимущество получения веществ
Понедельник, октября 26, 2009Преимущество получения этих веществ из микробной клетки по сравнению, например, с химическим синтезом или другими технологиями очевидно, так как: а) микробные клетки можно выращивать в больших объемах в короткие сроки на недефицитных питательных средах и по сравнительно простой технологии; б) большинство химически сложных веществ, получаемых из микробов, пока недоступны для синтеза другими способами; в) для микробиологической промышленности не требуется сложной аппаратуры и в ней в основном применима аппаратура, используемая в химической промышленности.
В биотехнологии нашли применение десятки видов бактерий, дрожжей, вирусов. Обычно используются виды микробов, обладающие высокой синтетической способностью, интенсивным ростом и накоплением целевого продукта, а также безопасностью и безвредностью при массовом культивировании в производственных условиях. Чаще всего в производственных условиях применяют актиномицеты и грибы для получения антибиотиков; дрожжи — в хлебопечении, виноделии, пивоварении, для получения кормового белка, питательных сред; бациллы — для получения ферментов; клостридии — для сбраживания Сахаров в ацетон, этанол, бутанол; псевдомонады — для получения витамина В, молочнокислые бактерии — в пищевой промышленности и т.д.
Кроме того, многие микроорганизмы (бактерии, дрожжи, вирусы) используются в качестве реципиентов генов целевых продуктов для получения рекомбинантных штаммов — продуцентов биотехнологической продукции (гормонов, интерферонов, им-муномодуляторов, вакцин и др.).
Генетическая инженерия в биотехнологии
Понедельник, октября 5, 2009Генетическую инженерию относят к новейшей биотехнологии. Генетическая инженерия сводится по существу к процессу получения рекомбинантных ДНК, содержащих, помимо присущего «хозяйской» ДНК набора природных генов, «чужой» ген или гены, взятые из другой ДНК. Метод получения рекомбинантных ДНК состоит из нескольких этапов: а) выделение ДНК из клеток организма; б) получение гибридных (рекомбинантных) молекул ДНК путем встройки в исходную ДНК «чужого» гена, вьщеленного из другой ДНК или полученного химическим синтезом; в) введение рекомбинантной ДНК в живую клетку (бактерий, дрожжей, растительных или животных клеток, клеток человека); г) создание условий для проявления (экспрессии) генов рекомбинантной ДНК в живой клетке и секреции нового продуцента, кодируемого «чужим» геном.
Показана схема получения рекомбинантных ДНК и рекомбинантных штаммов микробов. Из рис.6.1 видно, что клонированный (т.е. выделенный из ДНК клетки) природный или химически синтезированный ген целевого продукта (например, инсулина, интерферона) встраивается в ДНК (например, в плазмиду какой-либо бактерии или в ДНК вируса) после расщепления ДНК с помощью ферментов рестриктаз. Вставленный в расщепленную ДНК ген «сшивается» с этой ДНК с помощью ферментов лигаз. Полученная рекомбинантная ДНК бактерий или вируса затем вводится в эту же микробную клетку или вирусную частицу, из которой была взята, и таким образом получают рекомбинантный штамм бактерий или вирусов.
При культивировании рекомбинантного штамма в процессе роста и размножения этот штамм синтезирует не свойственный ему продукт, кодируемый встроенным чужеродным геном (например, инсулин, интерферон).
На этом принципе в настоящее время получены сотни рекомбинантных штаммов бактерий, дрожжей, вирусов, способных продуцировать разнообразные биологически активные вещества: антигены, антитела, ферменты, гормоны, иммуномоду-ляторы и др. Технология получения биологически активных веществ, основанная на применении рекомбинантных штаммов по существу не отличается от типовой биотехнологической схемы. Она сводится к культивированию рекомбинантного штамма, выделению синтезируемого штаммом целевого продукта, его очистке и концентрированию и созданию конечной формы препарата.
В настоящее время
Понедельник, сентября 28, 2009В настоящее время уже разработаны сотни медицинских препаратов, полученных на основе генетической инженерии. Многие из них внедрены в практику и применяются в медицине. Это гормоны (инсулин и гормон роста человека), антикоагулянты и тромболитики (тканевой активатор плазминогена, факторы VIII и IX), вакцины («дрожжевая» вакцина против гепатита В), иммуномодуляторы (интерфероны а, р и у, ин-терлейкины 1, 2 и др., фактор некроза опухолей, пептиды тимуса, миелопептиды), ферменты (уреаза), ангиогенин, диагностические препараты (на ВИЧ-инфекцию, на вирусные гепатиты и др.), моноклональные антитела, колониестимулирующие факторы (макрофагальный, гранулоцитарный и др.), а также многие биологически активные пептиды.
Инфекционные заболевания разделили
Воскресенье, сентября 13, 2009В соответствии с распространенностью С.В.Прозоровский с соавт. инфекционные заболевания разделили на:
• кризисные — заболеваемость более 100 случаев на 100 000 населения (например, СПИД);
• массовые — заболеваемость 100 случаев на 100 000 населения (например, грипп и другие ОРЗ, острые кишечные инфекции, гнойно-воспалительные заболевания);
• распространенные управляемые — заболеваемость 20—100 случаев на 100 000 населения (например, корь, дифтерия, столбняк, полиомиелит);
• распространенные неуправляемые — заболеваемость менее 20 случаев на 100 000 населения (например, газовая гангрена, псевдотуберкулез);
• спорадические — единичные случаи на 100 000 населения (например, сыпной тиф).
Эндемия не характеризует интенсивность эпидемического процесса
Воскресенье, сентября 13, 2009Эндемия не характеризует интенсивность эпидемического процесса, этот уровень включает в себя относительную частоту заболеваемости данной нозологической формой на данной географической территории. Различают эндемию природно-очаговую, связанную с природными условиями и ареалом распространения в природе резервуаров инфекции и переносчиков (например, природные очаги чумы), и эндемию статическую, обусловленную комплексом климато-географических и социально-экономических факторов (например, холера в Индии и Бангладеш).
Интенсивность эпидемического процесса
Воскресенье, сентября 13, 2009Интенсивность эпидемического процесса выражается в показателях заболеваемости и смертности на 10 000 или 100 000 населения, с указанием названия болезни, территории и исторического отрезка времени. Эпидемиологи различают 3 степени интенсивности эпидемического процесса:
• спорадическая заболеваемость — это обычный уровень заболеваемости данной нозологической формой на данной территории в данный исторический отрезок времени;
• эпидемия — это уровень заболеваемости данной нозологической формой на данной территории в конкретный отрезок времени, резко превышающий уровень спорадической заболеваемости;
• пандемия — это уровень заболеваемости данной нозологической формой на данной территории в конкретный отрезок времени, резко превышающий уровень обычных эпидемий. Как правило, такой уровень заболеваемости трудно удержать в рамках определенного географического региона, и инфекция обычно быстро распространяется, захватывая новые и новые территории (например, пандемии чумы, холеры, гриппа, ВИЧ-инфекции и др.). Не исключена возможность пандемии какого-либо заболевания в строгих географических рамках [например, пандемия сыпного тифа в период гражданской войны в России (1918—1922), которая не вышла за границы России].
Понятие об эпидемическом процессе
Воскресенье, сентября 13, 2009Эпидемический процесс — это процесс возникновения и распространения среди населения специфических инфекционных состояний: от бессимптомного носительства до манифестных заболеваний, вызванных циркулирующим в коллективе возбудителем. Условия и механизмы формирования эпидемического процесса, методы его изучения, а также совокупность противоэпидемических мероприятий, направленных на предупреждение и снижение инфекционных болезней, являются предметом изучения специальной науки — эпидемиологии.
Биологической основой развития эпидемического процесса служит паразитарная система, т.е. взаимодействие популяций паразита и хозяина. В процессе такого взаимодействия при любой инфекции или инвазии происходит взаимное влияние популяций паразита и хозяина, которые в результате этого взаимно адаптационно изменяются. Взаимодействие паразитарной системы с социальными условиями превращает ее в эпидемический процесс.
Эпидемический процесс обусловливает непрерывность взаимодействия 3 его элементов: 1) источника инфекции; 2) механизмов, путей и факторов передачи; 3) восприимчивости коллектива. Выключение любого из этих звеньев приводит к прерыванию эпидемического процесса. Решающую роль в развитии эпидемического процесса играют социальные факторы окружающей среды.