Фазово-контрастная микроскопия — метод микроскопического наблюдения прозрачных, неокрашенных, не поглощающих света объектов, основанный на усилении контраста изображения. Прозрачные неокрашенные объекты (в том числе живые микроорганизмы) отличаются от окружающей среды по показателю преломления, не поглощают свет, но изменяют его фазу. Эти изменения не улавливаются глазом. При фазово-контрастной микроскопии свет, не поглощенный объектом, проходит через так называемое фазовое кольцо, нанесенное на одну из линз объектива. Фазовое кольцо смещает фазу этого проходящего света на четверть длины волны и снижает его интенсивность. Прохождение прямого, не поглощенного объектом света через фазовое кольцо обеспечивается кольцевой диафрагмой конденсора. Лучи, даже немного отклоненные (рассеянные) в препарате, не попадают в фазовое кольцо и не претерпевают сдвига фазы. В результате разность фаз между отклоненными и неотклоненными лучами усиливается, давая контрастное изображение структуры препарата. Фазово-контрастную микроскопию используют для прижизненного изучения бактерий, грибов, простейших, клеток растений и животных.
Posts Tagged ‘организм’
Фазово-контрастная микроскопия
Вторник, декабря 1, 2009Люминесцентная микроскопия
Вторник, ноября 24, 2009Люминесцентная микроскопия (флюоресцентная микроскопия) — метод световой микроскопии, позволяющий наблюдать первичную или вторичную люминесценцию микроорганизмов. Люминесценция (от лат. lumen, luminis — свет) — особый вид свечения, которое возбуждается коротковолновой частью видимого света либо ультрафиолетовыми лучами.
Преимущество получения веществ
Понедельник, октября 26, 2009Преимущество получения этих веществ из микробной клетки по сравнению, например, с химическим синтезом или другими технологиями очевидно, так как: а) микробные клетки можно выращивать в больших объемах в короткие сроки на недефицитных питательных средах и по сравнительно простой технологии; б) большинство химически сложных веществ, получаемых из микробов, пока недоступны для синтеза другими способами; в) для микробиологической промышленности не требуется сложной аппаратуры и в ней в основном применима аппаратура, используемая в химической промышленности.
В биотехнологии нашли применение десятки видов бактерий, дрожжей, вирусов. Обычно используются виды микробов, обладающие высокой синтетической способностью, интенсивным ростом и накоплением целевого продукта, а также безопасностью и безвредностью при массовом культивировании в производственных условиях. Чаще всего в производственных условиях применяют актиномицеты и грибы для получения антибиотиков; дрожжи — в хлебопечении, виноделии, пивоварении, для получения кормового белка, питательных сред; бациллы — для получения ферментов; клостридии — для сбраживания Сахаров в ацетон, этанол, бутанол; псевдомонады — для получения витамина В, молочнокислые бактерии — в пищевой промышленности и т.д.
Кроме того, многие микроорганизмы (бактерии, дрожжи, вирусы) используются в качестве реципиентов генов целевых продуктов для получения рекомбинантных штаммов — продуцентов биотехнологической продукции (гормонов, интерферонов, им-муномодуляторов, вакцин и др.).
Генетическая инженерия в биотехнологии
Понедельник, октября 5, 2009Генетическую инженерию относят к новейшей биотехнологии. Генетическая инженерия сводится по существу к процессу получения рекомбинантных ДНК, содержащих, помимо присущего «хозяйской» ДНК набора природных генов, «чужой» ген или гены, взятые из другой ДНК. Метод получения рекомбинантных ДНК состоит из нескольких этапов: а) выделение ДНК из клеток организма; б) получение гибридных (рекомбинантных) молекул ДНК путем встройки в исходную ДНК «чужого» гена, вьщеленного из другой ДНК или полученного химическим синтезом; в) введение рекомбинантной ДНК в живую клетку (бактерий, дрожжей, растительных или животных клеток, клеток человека); г) создание условий для проявления (экспрессии) генов рекомбинантной ДНК в живой клетке и секреции нового продуцента, кодируемого «чужим» геном.
Показана схема получения рекомбинантных ДНК и рекомбинантных штаммов микробов. Из рис.6.1 видно, что клонированный (т.е. выделенный из ДНК клетки) природный или химически синтезированный ген целевого продукта (например, инсулина, интерферона) встраивается в ДНК (например, в плазмиду какой-либо бактерии или в ДНК вируса) после расщепления ДНК с помощью ферментов рестриктаз. Вставленный в расщепленную ДНК ген «сшивается» с этой ДНК с помощью ферментов лигаз. Полученная рекомбинантная ДНК бактерий или вируса затем вводится в эту же микробную клетку или вирусную частицу, из которой была взята, и таким образом получают рекомбинантный штамм бактерий или вирусов.
При культивировании рекомбинантного штамма в процессе роста и размножения этот штамм синтезирует не свойственный ему продукт, кодируемый встроенным чужеродным геном (например, инсулин, интерферон).
На этом принципе в настоящее время получены сотни рекомбинантных штаммов бактерий, дрожжей, вирусов, способных продуцировать разнообразные биологически активные вещества: антигены, антитела, ферменты, гормоны, иммуномоду-ляторы и др. Технология получения биологически активных веществ, основанная на применении рекомбинантных штаммов по существу не отличается от типовой биотехнологической схемы. Она сводится к культивированию рекомбинантного штамма, выделению синтезируемого штаммом целевого продукта, его очистке и концентрированию и созданию конечной формы препарата.
Применение генетической инженерии в биотехнологии
Понедельник, сентября 21, 2009Применение генетической инженерии в биотехнологии оправдано в тех случаях, когда: а) нужное вещество невозможно получить никаким другим способом; б) если технология эффективнее и экономичнее традиционной или в) если она более безопасна для человека и окружающей среды. Например, антигены для создания вакцин против некультивируемых микроорганизмов (плазмодий малярии, возбудитель сифилиса) можно получить только генно-инженерным способом. Генно-инженерный интерферон превосходит по активности интерферон, полученный из лейкоцитов крови, и значительно дешевле последнего. Приготовление препаратов из антигенов возбудителей особо опасных инфекций (чума, холера) можно заменить биосинтезом их рекомбинантными штаммами непатогенных бактерий.
Эколого-эпидемическая классификация инфекционных болезней
Воскресенье, сентября 13, 2009С учетом изложенных выше особенностей эпидемического процесса разработана современная эколого-эпидемиологическая классификация инфекционных болезней человека.
Эколого-эпидемиологическое разделение всех инфекционных болезней человека должно учитывать прежде всего среду обитания (резервуар) возбудителя в природе, с которой так или иначе связано заражение человека. Существуют 3 главные специфические среды обитания: организм человека (антропонозы), организм животного (зоонозы), внешняя среда (сапронозы). При антропонозах человек — единственный резервуар возбудителя в природе и источник заражения. В основу классификации положен в этом случае характер взаимоотношений возбудителя с организмом человека (локализация) либо с человеческой популяцией (механизм передачи). При более детальной классификации антропонозов придерживаются общепринятого деления на кишечные, кровяные, респираторные, инфекции наружных покровов и вертикальные (от матери плоду) инфекции.
Принципиально другая картина наблюдается при инфекциях, возбудители которых имеют внечеловеческие резервуары в природе. При этих инфекциях локализация возбудителя в организме человека или механизм его передачи от человека человеку вовсе не причина, а следствие процессов, обеспечивающих нормальную жизнедеятельность патогенного микроба.
Восприимчивость коллектива
Воскресенье, сентября 13, 2009Следующим элементом эпидемического процесса является восприимчивость коллектива. Установлено, что, если иммунная «прослойка» в популяции составляет 95 % и выше, то в данном коллективе достигается состояние эпидемического благополучия, и циркуляция возбудителя прекращается. Поэтому задачей по предупреждению эпидемий является создание в коллективах иммунной «прослойки» путем проведения массовой вакцинации против соответствующих возбудителей.
В соответствии с указанным выше противоэпидемические мероприятия, проводимые в коллективе, могут быть направлены на различные звенья эпидемического процесса.
К мероприятиям 1-й группы относится комплекс мер, направленных на изоляцию источника инфекции: больных необходимо выявлять, изолировать и лечить; носителей — выявлять, ставить на учет и санировать; больных животных обычно уничтожают (или лечат, изолируют); карантинные мероприятия.
Мероприятия 2-й группы, направленные на разрыв механизмов и путей передачи, включают в себя комплекс санитарно-гигиенических мероприятий по благоустройству населенных пунктов (например, централизованное водоснабжение и канализация), разукрупнение организованных коллективов, санитарный надзор за объектами пищевой промышленности и общественного питания, соблюдение правил асептики, антисептики, дезинфекции и стерилизации в больничных учреждениях, уничтожение кровососущих эктопаразитов и др. Это наиболее трудоемкие и, к сожалению, наименее эффективные мероприятия, особенно при инфекциях, характеризующихся множественностью механизмов, путей и факторов передачи (например, зоонозные или внутрибольничные инфекции).
Мероприятия 3-й группы, направленные на повышение невосприимчивости коллектива, включают создание искусственно приобретенного иммунитета (активного, путем проведения вакцинации или пассивного с помощью сывороток и иммуноглобулинов), а также улучшение социально-бытовых условий, влияющих на резистентность организма человека. Важное значение имеет санитарно-просветительная работа среди населения.
В соответствии с эффективностью проводимых противоэпидемических мероприятий инфекции можно подразделить на управляемые, при которых имеются эффективные меры воздействия на одно или несколько звеньев эпидемического процесса (например, вакцинация), и неуправляемые, при которых эффективные меры отсутствуют. Поэтому конечной целью эпидемиологии по борьбе с управляемыми инфекциями является их ликвидация или резкое снижение в глобальном масштабе. Примером может служить ликвидация такой особо опасной инфекции, как натуральная оспа. В ближайших планах ВОЗ стоит ликвидация ряда других управляемых инфекций, таких как полиомиелит, корь и др.
Русский ученый-эпидемиолог Л.В.Громашевский
Воскресенье, сентября 13, 2009Русский ученый-эпидемиолог Л.В.Громашевский сформулировал закон соответствия механизма передачи с локализацией возбудителя в организме. По этому закону все инфекционные болезни по механизму и основным путям передачи можно представить следующим образом: 1) кишечные инфекции; 2) инфекции дыхательных путей (респираторные); 3) трансмиссивные (или кровяные) инфекции; 4) инфекции наружных покровов. В соответствии с этим делением для каждой из групп присущи основные пути передачи инфекции: для кишечных инфекций — это алиментарный, водный и контактно-бытовой; для респираторных — воздушно-капельный и воздушно-пылевой; для кровяных — через переносчиков, парентеральный и половой; для инфекций наружных покровов — раневой и контактно-половой пути передачи. Кроме этих основных механизмов, при некоторых инфекциях возможен вертикальный путь передачи инфекции от матери плоду и через зародышевые клетки.
Инфекции, при которых источником инфекции служит только человек
Воскресенье, сентября 13, 2009Инфекции, при которых источником инфекции служит только человек, называются антропонозны-ми, а инфекции, при которых источником являются больные животные, но может болеть и человек — зоонознымы. Кроме того, выделяют группу сапронозов, при которых источником инфекции служат объекты окружающей среды.
Возбудители сапронозов являются псевдопаразитами человека и животных. Они постоянно и естественно обитают в окружающей среде (вода, почва) и для поддержания своего существования в природе необязательно нуждаются в эпидемическом процессе. К сапронозам, например, относятся легионелле-зы, иерсиниозы.
Второй элемент эпидемического процесса составляют механизм, пути и факторы передачи. Под механизмом передачи понимают способ перемещения возбудителя инфекционных и инвазивных заболеваний из зараженного организма в восприимчивый. Этот механизм включает последовательную смену 3 фаз (стадий): выведение возбудителя из организма хозяина в окружающую среду; пребывание возбудителя в объектах окружающей среды (биотических или абиотических); внедрение возбудителя в восприимчивый организм. Различают фекалъно-оральный, аэрогенный (респираторный), кровяной (трансмиссивный), контактный и вертикальный (от одного поколения к другому, т.е. от матери плоду трансплацентарно) механизмы передачи. Факторы передачи — это элементы внешней среды, обеспечивающие перенос микробов из одного организма в другой. К ним относятся вода, пища, почва, воздух, живые членистоногие, предметы окружающей обстановки. Путь передачи — это конкретные элементы внешней среды или их сочетание, обеспечивающие попадание возбудителя из одного организма в другой в определенных внешних условиях. Для фекально-орального механизма передачи характерны алиментарный (пищевой), водный и контактный (непрямой контакт) пути передачи; для аэрогенного — воздушно-капельный и воздушно-пылевой; для кровяного — через укусы кровососущих эктопаразитов, парентеральный и половой; для контактного — раневой и контактно-половой (прямой контакт); для вертикального — трансплацентарный путь.
Первый элемент эпидемического процесса
Воскресенье, сентября 13, 2009Первый элемент эпидемического процесса представляет собой источник инфекции. Понятие «источник возбудителя инфекции» означает живой или абиотический объект, являющийся местом естественной жизнедеятельности патогенных микробов, из которого происходит заражение людей или животных. Источником инфекции могут быть организм человека (больного или носителя) и животного, а также абиотические объекты окружающей среды (вода, пища и др.).