При обычной световой микроскопии наблюдаемый объект (в том числе и микробы) рассматриваются в проходящем свете. Поскольку микробы, как и другие биологические объекты, малоконтрастны, то для лучшей видимости их окрашивают.
Archive for the ‘Классификация и морфология микробов’ Category
При обычной световой микроскопии
Вторник, декабря 15, 2009Темнопольная микроскопия
Вторник, декабря 8, 2009С целью расширения границы видимости применяют другие виды световой микроскопии. Темнопольная микроскопия — метод микроскопического исследования объектов, не поглощающих свет, плохо видимых при методе светлого поля. При темнопольной микроскопии объекты освещаются косыми лучами или боковым пучком света, что достигается при помощи специального конденсора — так называемого конденсора темного поля. При этом в объектив микроскопа попадают только лучи, рассеянные объектами, находящимися в поле зрения. Поэтому наблюдатель видит эти объекты ярко светящимися на темном фоне. Темнопольную микроскопию применяют для прижизненного изучения трепонем, лептоспир, боррелий, жгутикового аппарата бактерий.
Фазово-контрастная микроскопия
Вторник, декабря 1, 2009Фазово-контрастная микроскопия — метод микроскопического наблюдения прозрачных, неокрашенных, не поглощающих света объектов, основанный на усилении контраста изображения. Прозрачные неокрашенные объекты (в том числе живые микроорганизмы) отличаются от окружающей среды по показателю преломления, не поглощают свет, но изменяют его фазу. Эти изменения не улавливаются глазом. При фазово-контрастной микроскопии свет, не поглощенный объектом, проходит через так называемое фазовое кольцо, нанесенное на одну из линз объектива. Фазовое кольцо смещает фазу этого проходящего света на четверть длины волны и снижает его интенсивность. Прохождение прямого, не поглощенного объектом света через фазовое кольцо обеспечивается кольцевой диафрагмой конденсора. Лучи, даже немного отклоненные (рассеянные) в препарате, не попадают в фазовое кольцо и не претерпевают сдвига фазы. В результате разность фаз между отклоненными и неотклоненными лучами усиливается, давая контрастное изображение структуры препарата. Фазово-контрастную микроскопию используют для прижизненного изучения бактерий, грибов, простейших, клеток растений и животных.
Люминесцентная микроскопия
Вторник, ноября 24, 2009Люминесцентная микроскопия (флюоресцентная микроскопия) — метод световой микроскопии, позволяющий наблюдать первичную или вторичную люминесценцию микроорганизмов. Люминесценция (от лат. lumen, luminis — свет) — особый вид свечения, которое возбуждается коротковолновой частью видимого света либо ультрафиолетовыми лучами.
Для люминесцентной микроскопии
Вторник, ноября 17, 2009Для люминесцентной микроскопии применяют либо специальные люминесцентные микроскопы, либо приставки к обычным «биологическим» микроскопам. Люминесцентная микроскопия нашла широкое применение в микробиологической диагностике, помогает проводить ускоренную идентификацию микробов. Первичная (собственная) люминесценция характерна для ряда биологически активных веществ (ароматические аминокислоты, порфирины, хлорофилл, витамины А и В2, тетрациклины и др.). Вторичная (или наведенная) люминесценция возникает в результате обработки исследуемого объекта светящимися красителями — флюорохромами (акридиновый оранжевый, ФИТЦ, бромид эти-дия и др.). Среди различных видов люминесцентной микроскопии наиболее распространены прямое флюорохромирование — окрашивание флюорохромами и иммунофлюоресценция (РИФ).
Иммунофлюоресценция
Вторник, ноября 10, 2009Люминесцентная микроскопия окрашенных флюорохромами фиксированных препаратов используется для обнаружения мико-бактерий, гонококков, возбудителя дифтерии, малярии в мазках крови и др. Этот метод более чувствителен по сравнению с обычными методами окраски (например, окраски по Цилю— Нельсену).
Иммунофлюоресценция (метод Кунса) — сочетание микроскопического метода с иммунологическим.
Электронная микроскопия
Вторник, ноября 3, 2009Электронная микроскопия — метод морфологического анализа с помощью потока электронов. Роль оптических линз выполняют электрические и магнитные поля. Использование в качестве источника излучения потока электронов повышает разрешающую способность микроскопа, измеряемую в нанометрах. Такая высокая разрешающая способность позволяет изучать структуру этих объектов (в том числе и микробов) на субклеточном и макромолекулярном уровне. Электронная микроскопия применяется для изучения субмикроскопической анатомии вирусов, бактерий, грибов, простейших. Метод используется для выявления вирусов с диагностической целью, например рота-вирусов в фильтратах фекалий. Использование электронной микроскопии в сочетании с иммунологическими методами обусловило развитие иммуно-электронной микроскопии. Иммунная электронная микроскопия сыграла большую роль при исследовании гепатитов А и В, вирусных гастроэнтеритов.
Особенность микроскопирования микробов
Воскресенье, сентября 13, 2009Особенность микроскопирования микробов — применение исключительно иммерсионной системы, состоящей из исследуемого объекта, иммерсионных масла и объектива. Преимущество этой системы заключается в том, что между объектом на предметном стекле и фронтальной линзой объектива находится среда с одинаковым показателем преломления (кедровое, вазелиновое масло и др.). Благодаря этому достигается наилучшее освещение объекта, так как лучи не преломляются и попадают в объектив.
Световой микроскоп
Воскресенье, сентября 13, 2009Световой микроскоп состоит из механической и оптической частей. Механическая часть представлена ножкой (или башмаком), тубусо-держателем, тубусом, предметным столиком. В нижней части тубу-содержателя находятся макро- и микровинты для грубой и тонкой подачи тубуса. Верхняя часть тубусодержателя снабжена головкой крепления револьвера для объективов. Оптическая часть микроскопа состоит из объектива, окуляра и осветительного аппарата. Объективы делятся на сухие и иммерсионные (погружные). Сухой объектив — это такой объектив, между фронтальной линзой которого и рассматриваемым препаратом находится воздух. Из-за разницы показателей преломления предметного стекла и воздуха часть световых лучей не попадает в глаз наблюдателя.
Основные методы изучения морфологии микробов
Воскресенье, сентября 13, 2009Микробы — существа, размеры которых ниже разрешающей способности глаза. Поэтому важными методами их исследования являются микроскопические, позволяющие изучать морфологию и структуру микробов. Среди микроскопических методов используют: 1) обычную световую микроскопию (светопольную), тем-нопольную, фазово-контрастную, ультрафиолетовую (люминесцентную); 2) электронную микроскопию и ее разновидности.